Методы лабораторной диагностики микоплазменной пневмонии

Mycoplasma pneumoniae – грамотрицательная бактерия веретенообразной формы с простым строением, лишенная клеточной стенки. Длина клетки в среднем равна 1–2 мкм, ширина – 0,1–0,2 мкм. Маленький размер микоплазм не позволяет обнаружить их с помощью световой микроскопии. M. pneumoniae локализуется у людей в дыхательных путях, вызывая их воспаление, а также трахеобронхит и атипичную пневмонию.

     Источниками инфекции являются:

• больной человек, в том числе с бессимптомными формами;
• здоровые носители;
• реконвалесценты, в том числе после курса антимикробной терапии.

     Возможно длительное бессимптомное носительство Mycoplasma pneumoniae у детей и взрослых, которое способствует распространению инфекции и сохранению микоплазм в дыхательных путях в течение нескольких недель или месяцев, а у иммуносупрессивных пациентов – в течение нескольких лет после первичной инфекции.

     Актуальным механизмом передачи Mycoplasma pneumoniae является аэрозольный, который реализуется воздушно-капельным путем. Воздушно-пылевой путь менее значим, т.к. Mycoplasma pneumoniae быстро погибает в высушенном состоянии. Mycoplasma pneumoniae может передаваться также контактно-бытовым путем. Для передачи инфекции нужен длительный близкий контакт и более продолжительное время по сравнению с другими возбудителями респираторных инфекций. Также возможен и  вертикальный механизм передачи возбудителя (трансплацентарно, интранатально). Однако указанные пути передачи регистрируют редко.

     Mycoplasma pneumoniae занимает лидирующее место среди возбудителей пневмоний после пневмококковой инфекции. Заболевания, связанные с поражением нижних дыхательных путей и вызываемые микоплазменной инфекцией, имеют тенденцию к тяжелому (12%) и хроническому (74%) течению.

     Для этиологической диагностики микоплазменной пневмонии применяют:

• обнаружение ДНК М. pneumoniae методом полимеразной цепной реакции (ПЦР);
• выявление антигена микоплазм в реакции прямой иммунофлуо­ресценции (РИФ);
• серологические исследования по обнаружению специфических антител класса IgM и IgG к M. pneumoniae в сыворотках крови методом иммуноферментного анализа (ИФА).

     С целью быстрой этиологической диагностики пневмонии реко­мендуется использовать ПЦР при исследовании биологического мате­риала, полученного из нижних дыхательных путей (мокрота при глубо­ком откашливании, аспираты из трахеи, мокрота, полученная в резуль­тате индукции посредством ингаляции гипертонического раствора на­трия хлорида, жидкость бронхоальвеолярного лаважа (БАЛ), получае­мая с помощью фибробронхоскопии).

          Подготовка к забору мазков из носоглотки и задней стенки глотки для ПЦР-исследования: предпочтительно сдавать мазки натощак, до визита в лабораторию запрещается курить, чистить зубы, жевать жевательную резинку и т.п.; в иных случаях между последним приемом пищи и сдачей материала должно пройти не менее 2 часов.

    Для сбора мокроты необходимо использовать стерильные разовые герметично закрывающиеся пластиковые контейнеры. Перед сбором мокроты необходимо тщательно прополоскать рот кипяченой водой. Сбор мокроты осуществляется натощак или не ранее 2 ч после еды. Сделать два глубоких вдоха, задерживая дыхание на несколько секунд, после каждого глубокого вдоха медленно выдохнуть. Затем вдохнуть в третий раз и с силой выдохнуть воздух. Еще раз вдохнуть и хорошо откашляться. Поднести контейнер как можно ближе ко рту и осторожно сплюнуть в него мокроту после откашливания. Плотно закрыть контейнер крышкой. Вымыть руки с мылом. Собранную для исследования утреннюю мокроту доставить в лабораторию не позднее, чем через 1–1,5 часа после сбора. Объем образца мокроты должен быть не менее 3 мл для взрослых и около I мл для детей.

     Забор мазков из носоглотки и задней стенки глотки для ПЦР-исследования: рабочей частью зонда-тампона провести вращательными движениями по поверхности миндалин, нёбных дужек и задней стенки ротоглотки. Перенести зонд-тампон в пробирку с 0,5 мл транспортной среды. Рабочую часть зонда-тампона, содержащую исследуемый материал, обломить и оставить в пробирке с транспортной средой. Пробирку плотно закрыть крышкой, не допуская зазора и смятия внутренней части крышки. В случае невозможности

обламывания погрузить рабочую часть зонда-тампона в транспортную среду и, прижав её к внутренней стороне пробирки, вращать 5–10 с, после чего зонд удалить, пробирку плотно

закрыть.

       С целью ретроспективной диагностики, когда больной уже нахо­дится в стадии реконвалесценции, необходимо использовать серологи­ческие исследования. Первичный иммунный ответ характеризуется синтезом IgM-анти­тел через 1— 3 недели с момента заражения, обнаружение которых сви­детельствует об острой фазе инфекции. Иммуноглобулины классов G появляются к концу 3—4 недели. Диагноз микоплазменной респиратор­ной инфекции подтверждает 4-кратная сероконверсия специфических антител в парных сыворотках крови. Для обследования делают забор крови из вены натощак. За час до забора крови необходимо воздержаться от стресса и курения.

     Непосредственное обнаружение антигенов М. pneumoniae в раз­личных биосубстратах (мазки из носоглотки, лаважная жидкость, биоптаты), полученных от больных с респираторной патологией, до на­стоящего времени в отдельных диагностических лабораториях проводят с использованием РИФ. Этот метод в сочетании с выявлением специфи­ческих антител к микоплазме в ИФА дает возможность подтвердить за­болевание, вызванное Mycoplasma pneumoniae. Следует учитывать, что гуморальные антитела сохраняются несколько лет.

     Для выявления некультивируемых и трудно культивируемых бактериальных возбудителей пневмонии (M. pneumoniae, C. pneumoniae,) в микробиологической лаборатории ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Брянской области» проводится исследование объединенного мазка из носоглотки и задней стенки глотки методом ПЦР. Также проводится исследование методом ИФА на определение специфических антител (IgM, IgG) к M. pneumoniae и C. pneumoniae в сыворотке крови.

     Прием и забор клинического материала для исследования проводится по адресу: г. Брянск, пр. Ленина, д.72, ежедневно в рабочие дни с 8-30 до 12-00. Телефон для справок 8(4832) 74-53-90. Срок выдачи результата исследования сыворотки крови методом ИФА составляет 3-5 рабочих дня, результата ПЦР-исследования – 2 рабочих дня.

Биолог микробиологической лаборатории  Дедушкина Е.А.