Методы лабораторной диагностики возбудителей внебольничных пневмоний
Пневмонии – группа различных по этиологии, патогенезу, морфологической характеристике острых инфекционных заболеваний, характеризующихся очаговым поражением респираторных отделов легких с обязательным наличием внутриальвеолярной экссудации.
Внебольничная пневмония (ВП) диагностируется в случае развития заболевания вне
стационара, либо в первые 48 ч с момента госпитализации. Перечень потенциальных возбудителей ВП включает более 100 микроорганизмов (бактерии, вирусы, грибы, простейшие).
Streptococcus pneumoniae является самым частым бактериальным возбудителем ВП. Пневмококковые пневмонии регистрируются у пациентов любого возраста, встречаются как в амбулаторной практике, так и в стационаре (в т. ч. среди госпитализированных в ОРИТ).
Важным клинически значимым бактериальным возбудителем ВП также является Haemophilus influenzae. По данным ряда исследований, H influenzae чаще встречается у пациентов с сопутствующей ХОБЛ и активных курильщиков, частота инфицирования данным возбудителем выше у пациентов с нетяжелой ВП.
Представители семейства Enterobacteriaceae (Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli и др.) и Pseudomonas aeruginosa выявляются менее чем у 5 % пациентов с ВП и относятся к категории редких возбудителей. Однако значимость данных микроорганизмов может возрастать у пациентов с тяжелой ВП, а инфицирование в несколько раз увеличивает вероятность неблагоприятного прогноза.
Еще один бактериальный возбудитель ВП - Staphylococcus aureus – редко встречается среди амбулаторных пациентов с ВП, в то же время у лиц с тяжелым течением заболевания его удельный вес может возрастать до 10 % и более. К инфицированию S. aureus предрасполагают многие факторы - пожилой возраст, проживание в домах престарелых, наркомания, злоупотребление алкоголем. Известно, что актуальность S. aureus как возбудителя ВП значительно возрастает во время эпидемий гриппа.
Также частыми возбудителями ВП являются Mycoplasma pneumoniae и Chlamydophila pneumoniae. Mycoplasma pneumoniae - бесстеночные, способные к автономному существованию бактерии, по уровню структурной организации занимающие промежуточное положение между бактериями и вирусами. Chlamydia pneumoniae — патогенная грамотрицательная бактерия, которая является облигатным внутриклеточным паразитом.
Своевременная этиологическая диагностика ВП особенно важна при пневмониях тяжелого течения у пациентов, госпитализированных в ОРИТ. При тяжелых пневмониях в первую очередь необходимо провести бактериологическое исследование на пневмококк и другие бактериальные этиологические агенты с учетом спектра их чувствительности к антибиотикам. Во время подъема заболеваемости гриппом и ОРВИ достаточно высока вероятность тяжелых пневмоний вирусной или вирусно-бактериальной природы. В этом случае алгоритм диагностики тяжелых пневмоний должен учитывать возможность бактериальной, вирусной или вирусно-бактериальной этиологии.
С целью быстрой этиологической диагностики пневмонии (особенно для выявления некультивируемых и трудно культивируемых бактериальных возбудителей (M. pneumoniae, C. pneumoniae) и респираторных вирусов) проводится исследование методом ПЦР объединенного мазка из носоглотки и задней стенки глотки или биологического материала, полученного из нижних дыхательных путей (мокрота, аспираты из трахеи, бронхоальвеолярный лаваж (БАЛ)).
Подготовка к забору мазков из носоглотки и задней стенки глотки для ПЦР-исследования: предпочтительно сдавать мазки натощак, до визита в лабораторию запрещается курить, чистить зубы, жевать жевательную резинку и т.п.; в иных случаях между последним приемом пищи и сдачей материала должно пройти не менее 2 часов.
Забор мазков из носоглотки и задней стенки глотки для ПЦР-исследования: рабочей частью зонда-тампона провести вращательными движениями по поверхности миндалин, нёбных дужек и задней стенки ротоглотки. Перенести зонд-тампон в пробирку с 0,5 мл транспортной среды. Рабочую часть зонда-тампона, содержащую исследуемый материал, обломить и оставить в пробирке с транспортной средой. Пробирку плотно закрыть крышкой, не допуская зазора и смятия внутренней части крышки. В случае невозможности обламывания погрузить рабочую часть зонда-тампона в транспортную среду и, прижав её к внутренней стороне пробирки, вращать 5–10 с, после чего зонд удалить, пробирку плотно закрыть. Недопустимо использование ножниц для обрезания рабочей части зонда-тампона!
Иммуносерологические исследования при ВП направлены на определение антител классов M, G к возбудителю в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа (ИФА). Первичный иммунный ответ характеризуется синтезом иммуноглобулинов класса М (IgM) через 1 - 3 недели с момента заражения, обнаружение которых свидетельствует об острой фазе инфекции. Иммуноглобулины класса G появляются к концу 3 - 4 недели.
«Золотым» стандартом микробиологической диагностики ВП является бактериологическое исследование мокроты на микрофлору и чувствительность к антибиотикам.
Правила получения свободно отделяемой мокроты:
- Для сбора мокроты необходимо использовать стерильные разовые герметично закрывающиеся пластиковые контейнеры.
2) Перед сбором мокроты необходимо тщательно прополоскать рот кипяченой водой.
3) Сбор мокроты осуществляется натощак или не ранее 2 ч после еды.
4) Сделать два глубоких вдоха, задерживая дыхание на несколько секунд, после каждого глубокого вдоха медленно выдохнуть. Затем вдохнуть в третий раз и с силой выдохнуть воздух. Еще раз вдохнуть и хорошо откашляться. Поднести контейнер как можно ближе ко рту и осторожно сплюнуть в него мокроту после откашливания. Плотно закрыть контейнер крышкой. Вымыть руки с мылом.
Собранную для исследования утреннюю мокроту доставить в лабораторию не позднее, чем через 1–1,5 часа после сбора. Объем образца мокроты должен быть не менее 3 мл для взрослых и около I мл для детей.
В микробиологической лаборатории ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Брянской области» проводится бактериологическое исследование мокроты на микрофлору и чувствительность к антибиотикам. Для выявления некультивируемых и трудно культивируемых бактериальных возбудителей (M. pneumoniae, C. pneumoniae,) и респираторных вирусов проводится исследование объединенного мазка из носоглотки и задней стенки глотки методом ПЦР. Также проводится исследование методом ИФА на определение специфических антител (IgM, IgG) к M. pneumoniae и C. pneumoniae в сыворотке крови.
Прием и забор клинического материала для исследования проводится по адресу:
г. Брянск, пр. Ленина, д.72, ежедневно в рабочие дни с 8-30 до 12-00.
Телефон для справок 8(4832) 74-53-90.
Срок выдачи результата бактериологического исследования мокроты и сыворотки крови методом ИФА составляет 3-5 рабочих дня, результата ПЦР-исследования – 2 рабочих дня.